葡萄球菌皮肤烫伤样综合征的快速诊断

　　葡萄球菌皮肤烫伤样综合征( staphylococcalscalded sk in syndrom e， SSSS) 是由金黄色葡萄球菌产生的表皮剥脱毒素引起， 主要发生于婴幼儿的严重感染， 该病来势凶猛， 若不及时治疗预后不良。所以， 早期、快速、准确的诊断， 对缩短病程、降低患儿死亡率具有重要意义。

　　1　材料与方法

　　1. 1　研究对象　1999 年3 月至2001 年2 月临床诊断为SSSS， 未用过抗生素及其他药物的患者共34 例， 男性18 例， 女性16 例， 年龄14 d～ 12 岁，平均5. 21 岁; 37 例脓疱疮患者和11 例非金黄色葡萄球菌型中毒性表皮坏死松解症患者。

　　1. 2　标本采集　SSSS 患者取原发皮损的渗液或痂皮、水疱液各1. 5 m l; 脓疱疮患者取原发皮损的脓液或痂皮; 非金黄色葡萄球菌型中毒性表皮坏死松解症患者取水疱液各1. 5 m l。标本均取2 份，其中一份直接接种于肉汤培养基中， 用于EL ISA 检测毒素， 另一份用于PCR。

　　1. 3　引　物　选取编码剥脱毒素A (ETA )、剥脱毒素B (ETB ) 蛋白的基因剥脱毒素A 基因(eta )、剥脱毒素B 基因(etb) 的特定核苷酸序列为引物， 由上海生工生物工程公司合成并纯化。引物1， 5′2 CTA TTTACTGTA GGA GCTA G - 3′， 引物2， 5′2 A TTTA TTTGA TGCTCTCTA T23′， 引物1和引物2 特异性扩增片段长度为741 bp ， 用于检测eta; 引物3， 5′2 A TACACACA TTACGGA TAA T23′， 引物4， 5′2 CAAA GTGTCTCCAAAA GTA T23′， 引物3 和引物4 特异性扩增片段长度为629 bp ，用于检测etb。

　　1. 4　标本DNA 的提取及PCR 扩增　提取摸板DNA ， PCR 循环参数： 首先95℃变性5 m in， 然后94℃变性30 s， 退火55℃ 30 s， 延伸72℃ 40 s， 扩增30 个循环， 最后72℃延伸5m in。扩增产物在2%琼脂糖凝胶(含0. 5 m g·L - 1溴化乙锭) 上电泳， 在暗箱式紫外检测分析仪内观测， 通过凝胶成像仪储存于电脑中。

　　2　结　果

　　共检测34 例SSSS 患者标本， 采用PCR 方法检测SSSS 原发皮损中的eta、etb、eta 和etb 阳性结果分别为21 例(61. 76% )、7 例(20. 58%) 和4 例(11. 76) ; 应用EL ISA 方法检测标本培养分离菌株ETA、ETB、ETA 和ETB 阳性结果分别为10 例(29. 41% )、4 例(11. 76% ) 和1 例(2. 94%)。经统计学处理差异有显著性(P < 0. 01) ， PCR 较EL ISA 方法敏感。

　　采用PCR 方法检测37 例脓疱疮患者原发皮损， 阳性结果eta 19 例( 51. 35% )、etb 8 例(21. 62% )、eta 和etb 1 例(2. 7% )。说明脓疱疮和SSSS关系密切， 表皮剥脱毒素是SSSS 的发病机理之一。非金黄色葡萄球菌型中毒性表皮坏死松解症患者的标本表皮松解毒素均为阴性。

　　3　讨　论

　　SSSS 是一种严重的主要发生于婴幼儿的金葡菌感染 ， 成人发生SSSS 主要见于免疫功能低下的病人。该病主要由凝固酶阳性噬菌体Ê 组71 型或55 型金葡菌引起， 该菌可产生表皮剥脱毒素， 该毒素的编码基因为eta 和etb，ETA 和ETB 。一般认为该毒素作为超抗原直接与MHCÊ 类分子的非多肽区外侧结合， 而不是与肽结合， 故无MHC 限制性， 所以能与多数T 细胞(CD4)结合， 为T 细胞活化提供信号， 通过刺激T 淋巴细胞产生补体和氧自由基及氧化氮， 引起皮肤棘层和颗粒层分离导致该征候群的发生。SSSS 病情急、变化快， 预后的好坏取决于诊断、治疗是否及时准确， 许多方法是先分离培养， 然后进行血清型或基因鉴定。这些方法的敏感度取决于金葡菌的生长状况、毒素分泌量、抗体滴度等因素，其阳性率不高且耗时长。本文作者采用PCR 的方法直接检测SSSS 患者原发皮损中的金葡菌eta、etb，结果表明， 应用PCR 方法检测SSSS 原发皮损的eta和etb 较EL ISA 方法检测标本培养分离菌株ETA和ETB 特异性强、敏感性高、快速准确， 统计学上差异有显著性(P < 0. 01)。对SSSS 的早期诊断、及时治疗和降低死亡率有重要价值， 且对中毒性表皮坏死松解症鉴别诊断具有重要意义。

　　多数SSSS 患者先有脓疱疮病史或脓疱疮接触史， 有报道一个产院育婴室30 名新生儿感染了SSSS， 其传染源是分娩室一名患有脓疱疮的工作人员。本文作者检测了37 例脓疱疮患者原发皮损，eta 和etb 的阳性率为75. 67% ， 说明脓疱疮的致病菌多数可产生表皮剥脱毒素， 脓疱疮与SSSS 关系密切。故应重视脓疱疮患者， 尤其是患者应避免接婴幼儿。应常规检查脓疱疮的表皮剥脱毒素， 以便发现亚临床感染， 给予及时、有效的治疗。

（实习编辑：王哲君）

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